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<title>32P-Postlabeling</title>

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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading"><span class="mw-page-title-main">32P-Postlabeling</span></h1>

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<div id="mw-content-text" class="mw-body-content mw-content-ltr" lang="de" dir="ltr"><div class="mw-content-ltr mw-parser-output" lang="de" dir="ltr"><p>Beim <b><sup>32</sup>P-Postlabeling</b> handelt es sich um eine Methode zum Nachweis von <a href="DNA-Addukt" title="DNA-Addukt">DNA-Addukten</a>.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Einzelschritt">Einzelschritt</h2></div>

<div class="mw-heading mw-heading3"><h3 id="Enzymatische_Hydrolyse">Enzymatische Hydrolyse</h3></div>

<p>Im ersten Schritt erfolgt eine enzymatische <a href="Hydrolyse" title="Hydrolyse">Hydrolyse</a> der <a href="DNA" class="mw-redirect" title="DNA">DNA</a> mittels <a href="Nuklease" class="mw-redirect" title="Nuklease">Nuklease</a> und <a href="Phosphodiesterase" class="mw-redirect" title="Phosphodiesterase">Phosphodiesterase</a>. Als Produkte entstehen 3'-Monophosphate. Enthielt die DNA DNA-Addukte, so entsteht ein Gemisch aus Addukten und adduktfreien <a href="Nukleotide" title="Nukleotide">Nukleotiden</a>.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading3"><h3 id="Adduktanreicherung">Adduktanreicherung</h3></div>

<p>Die Anreicherung ist fakultativ, erhöht jedoch die Empfindlichkeit. In einem zweiten Schritt spaltet eine selektive P1-Nuklease das 3'-Phosphat von den normalen Nukleotiden ab. Die durch Addukte modifizierten Nukleotide sind abbauresistent, so dass es zu einer Anreicherung kommt.

</p><p>Alternativ ist es auch möglich, mittels <a href="N-Butanol" class="mw-redirect" title="N-Butanol"><i>n</i>-Butanol</a>-Extraktion die Addukte mit hydrophober Struktur zu extrahieren und somit anzureichern.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading3"><h3 id="Phosphorylierung">Phosphorylierung</h3></div>

<p>Zur Markierung der Nukleotide wird durch T4-Polynukleotid-Kinase ein radioaktiver Phosphatrest von [γ-<sup>32</sup>P]-<a href="Adenosintriphosphat" title="Adenosintriphosphat">ATP</a> auf die Nukleotide im Ansatz übertragen. Es entstehen Desoxyribonukleosid-3'-[5'-<sup>32</sup>P]-bisphosphate.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading3"><h3 id="Trennung_und_Nachweis">Trennung und Nachweis</h3></div>

<p>Mittels mehrdimensionaler <a href="D%C3%BCnnschichtchromatographie" title="Dünnschichtchromatographie">Dünnschichtchromatographie</a> und Szintillation bzw. mittels <a href="Hochleistungsfl%C3%BCssigkeitschromatographie" title="Hochleistungsflüssigkeitschromatographie">Hochleistungsflüssigkeitschromatographie</a> (HPLC) kann nun der Nachweis erfolgen. Die Nachweisgrenze liegt bei 1 Addukt auf 10<sup>10</sup> N.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Literatur">Literatur</h2></div>

<ul><li>Ramesh C. Gupta: <i>Enhanced Sensitivity of 32P-Postlabeling Analysis of Aromatic Carcinogen: DNA Adducts</i>. in: <i><a href="Cancer_Research" title="Cancer Research">Cancer Research</a></i>, 45, 5656–5662, November 1985, (<a rel="nofollow" class="external text" href="http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/45/11_Part_2/5656.pdf">PDF</a>).</li>

<li>M. V. Reddy und K. Randerath: <i>Nuclease P1-mediated enhancement of sensitivity of 32P-postlabeling test for structurally diverse DNA adducts.</i> in: <a href="Carcinogenesis" title="Carcinogenesis">Carcinogenesis</a> 7(1986) 1543–1551. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3017601?dopt=Abstract">PMID 3017601</a></li>

<li>D. H. Phillips: <i>Detection of DNA modifications by the 32P-postlabelling assay.</i> in: Mut. Res., 378(1997) 1–12. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9288880?dopt=Abstract">PMID 9288880</a></li>

<li>K. Randerath und E. Randerath: <i>P-32 postlabeling methods for DNA adduct detection - overview and critical-evaluation.</i> in: Drug Metab. Rev., 26(1994) 67–85. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8082582?dopt=Abstract">PMID 8082582</a></li>

<li>K. Randerath, M. V. Reddy und R. C. Gupta: <i>32P-labelling test for DNA damage.</i> in: <a href="PNAS" class="mw-redirect" title="PNAS">PNAS</a>, 78(1981) 6126–6129. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7031643?dopt=Abstract">PMID 7031643</a></li>

<li>A. Weston: <i>Physical methods for the detection of carcinogen-DNA adducts in humans.</i> in: Mut. Res., 288(1993) 19–29. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7686262?dopt=Abstract">PMID 7686262</a></li>

<li>A. Weston und M. C. Poirier in H. A. Milman und <a href="Elizabeth_K._Weisburger" title="Elizabeth K. Weisburger">E. K. Weisburger</a> (Editors): „Handbook of Carcinogen Testing“.</li></ul></div><div><div class="zim-footer">

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